細(xì)胞培養(yǎng)的過程控制有點像走鋼絲，要在最短的時間內(nèi)，通過細(xì)胞培養(yǎng)的方法獲取更高的產(chǎn)量，則必須謹(jǐn)慎且連續(xù)地控制工藝過程中的參數(shù)；若過程管理出現(xiàn)失誤，將導(dǎo)致生產(chǎn)效率下降、運行時間延長；更糟糕的，可能會導(dǎo)致整個批次的細(xì)胞培養(yǎng)失敗。

　　你在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，會遇到哪些問題

　　1、首先講一下細(xì)胞生長緩慢的原因：

　　a)更換了血清或者培養(yǎng)基，細(xì)胞需要一段時間適應(yīng)一下；

　　b)由于細(xì)胞的特殊種類，培養(yǎng)基中缺少某些生長因子；

　　c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細(xì)菌污染；

　　d)傳代的時候細(xì)胞密度過低；

　　e)細(xì)胞狀態(tài)老化；

　　2、解決上述問題的方法：

　　a)如果實驗室沒有某種細(xì)胞最適宜的培養(yǎng)基，可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些，然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例，25%、50%、75%到100%，傳代3-5次后，讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)。

　　b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染，可以先不加抗生素，觀察細(xì)胞狀態(tài)。

　　c)增加細(xì)胞的接種密度。

　　d)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞老化的時候，及時更換新的細(xì)胞。

　　e)如果懷疑是支原體污染，一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿，及時清潔消毒孵箱。

　　3、造成細(xì)胞死亡的原因：

　　a)細(xì)胞消化過度；

　　b)沒有及時換液，營養(yǎng)成分消耗殆盡；

　　c)如果前一天細(xì)胞的狀態(tài)很好，換液之后就全死了，應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問題。

　　4、如何判定細(xì)胞是否發(fā)生支原體污染：可以選用直接培養(yǎng)法、熒光染色或PCR方法檢測，比較常用的是PCR。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生支原體污染時，原則上是能夠去除支原體的，但是整個過程耗時耗力，還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細(xì)胞存量很少的情況下，建議發(fā)現(xiàn)污染時立刻棄掉，重新培養(yǎng)。

　　5、如果孵箱中只是某種細(xì)胞持續(xù)性大量死亡，而其他細(xì)胞狀態(tài)都沒問題的話，基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細(xì)胞的真菌或細(xì)菌。

　　6、其他注意事項：每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水)；每兩周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制)；可以在孵箱底部放一個燒杯，里面放入飽和硫酸銅，可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情況很嚴(yán)重，建議不要使用。